摘(zhai)要(yao)：按(an)照(zhao)GMP 要(yao)求，制定清潔分(fen)析方(fang)(fang)法(fa)驗(yan)證方(fang)(fang)案，通(tong)過(guo)對化(hua)學殘(can)留(liu)物(wu)檢測分(fen)析方(fang)(fang)法(fa)驗(yan)證，確認(ren)可適用于清潔驗(yan)證的分(fen)析方(fang)(fang)法(fa)。關鍵詞：GMP 化(hua)學殘(can)留(liu)物(wu)清潔分(fen)析方(fang)(fang)法(fa)驗(yan)證
在制藥(yao)工業生(sheng)(sheng)產中，一條(tiao)生(sheng)(sheng)產線(xian)往往能生(sheng)(sheng)產幾(ji)個(ge)產品或原料藥(yao)，
因此現版GMP 要(yao)求在藥品(pin)生(sheng)產(chan)(chan)過(guo)程中必須對(dui)生(sheng)產(chan)(chan)設備進行有效的(de)清潔，以防止本產(chan)(chan)品(pin)對(dui)后(hou)續生(sheng)產(chan)(chan)的(de)產(chan)(chan)品(pin)造成(cheng)化(hua)學物(wu)質或微生(sheng)物(wu)的(de)污染，倍(bei)值在工作(zuo)曲線上對(dui)應(ying)的(de)待(dai)測物(wu)濃度即為估算的(de)檢(jian)出限。
2.1.2非儀器分析(xi)中的方法：
用已知濃度的(de)被測物，試(shi)驗(yan)出(chu)其(qi)能被可靠地(di)檢測出(chu)的(de)最低濃度或量。
從而而影響了后續產品的質量和安全性。為(wei)了能有效的檢(jian)(jian)(jian)測出設(she)備中的化學殘留物，應使用經(jing)驗證(zheng)的、檢(jian)(jian)(jian)出靈(ling)敏(min)度高的檢(jian)(jian)(jian)驗方(fang)法來檢(jian)(jian)(jian)測污染物，即進行(xing)清(qing)潔分析方(fang)法驗證(zheng)。
通(tong)常清潔分析方(fang)法(fa)驗證(zheng)包括：取樣方(fang)法(fa)驗證(zheng)和檢驗方(fang)法(fa)驗證(zheng)。
一、取樣方法驗證(zheng)包括
1.棉簽取樣方法驗證
取(qu)樣過程需要驗證(zheng)，通過回(hui)(hui)收率(lv)實(shi)驗驗證(zheng)取(qu)樣過程的回(hui)(hui)收率(lv)和重現性，通常取(qu)樣回(hui)(hui)收率(lv)和檢(jian)驗方法回(hui)(hui)收率(lv)結合進(jin)行，總回(hui)(hui)收率(lv)一(yi)般不(bu)低(di)于(yu)70%，RSD不(bu)大于(yu)20%。
驗證方法如下：
1.1準備一塊與設備表面(mian)相同的材質。1.2在鋼(gang)板上劃出10*10CM的區(qu)域。
1.3將20倍限度量(liang)的待檢測物溶液，定量(liang)裝入(ru)經(jing)校(xiao)驗注射器(qi)。1.4其(qi)溶液均勻(yun)涂抹在10*10CM的區域內。1.5自(zi)然干燥(zao)或電吹風溫和(he)干燥(zao)。
1.6用(yong)選定的(de)擦拭(shi)溶劑潤濕棉簽左右或上下前進式進行(xing)擦拭(shi)。1.7將擦拭(shi)棉簽放入棉簽管中(zhong)，加入預定溶劑5ml，超聲萃取。1.8用(yong)經驗(yan)證的(de)檢驗(yan)方法，計算回(hui)收(shou)率(lv)和回(hui)收(shou)率(lv)的(de)RSD。
2.淋(lin)(lin)洗(xi)(xi)的(de)取樣(yang)(yang)(yang)方法(fa)根據管(guan)路(lu)設計，選(xuan)擇淋(lin)(lin)洗(xi)(xi)線路(lu)下游或最低(di)點的(de)幾個取樣(yang)(yang)(yang)口，分別(bie)按照(zhao)微生(sheng)(sheng)物取樣(yang)(yang)(yang)和(he)化學取樣(yang)(yang)(yang)規(gui)程(cheng)在(zai)(zai)最后(hou)一步淋(lin)(lin)洗(xi)(xi)近結束時(shi)取樣(yang)(yang)(yang)。淋(lin)(lin)洗(xi)(xi)法(fa)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)可對(dui)沖(chong)(chong)洗(xi)(xi)液直(zhi)接檢(jian)(jian)測也可以對(dui)沖(chong)(chong)洗(xi)(xi)液稀釋(shi)后(hou)檢(jian)(jian)測，無論(lun)是直(zhi)接檢(jian)(jian)測還是稀釋(shi)后(hou)檢(jian)(jian)測都應(ying)在(zai)(zai)接到樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)后(hou)先將(jiang)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)同(tong)空白溶劑做視覺(jue)檢(jian)(jian)查(cha)，確定是否有顏色差(cha)異(yi)和(he)異(yi)物存在(zai)(zai)。如(ru)果有上述(shu)現象發生(sheng)(sheng)，直(zhi)接判為不合格。
通(tong)常(chang)淋(lin)(lin)洗液方法不(bu)做回收(shou)率驗證(zheng)，定(ding)量檢查做回收(shou)率驗證(zheng)，可以用淋(lin)(lin)洗溶(rong)劑沖(chong)洗已(yi)知量的分(fen)析物回收(shou)率，回收(shou)率通(tong)常(chang)不(bu)低于95%。
二、清潔(jie)檢驗(yan)分(fen)析方法驗(yan)證
用(yong)于清潔驗(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)的(de)分(fen)析方法，其驗(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)的(de)原理和一(yi)般的(de)方法驗(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)相(xiang)同。清潔驗(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)中(zhong)的(de)分(fen)析對象(xiang)是殘留物(wu)，驗(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)中(zhong)所用(yong)的(de)分(fen)析方法一(yi)般與雜質的(de)定(ding)量(liang)實(shi)驗(yan)相(xiang)仿，要求就專(zhuan)屬性、檢測限、定(ding)量(liang)限、線(xian)性和范圍、精密度、準確度進行驗(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)。
1.專屬性
專屬性(xing)要求同條件下用(yong)空白溶(rong)(rong)劑、空白棉(mian)簽溶(rong)(rong)液、空白棉(mian)簽加待分析(xi)殘留物樣品(pin)溶(rong)(rong)液，待分析(xi)殘留物樣品(pin)溶(rong)(rong)液各進樣證(zheng)明本方法不存在干(gan)擾，或者干(gan)擾可(ke)用(yong)適當的(de)方法消除掉。
2.檢測限(xian)（LOD ）和(he)定量限(xian)（LOQ ）
在(zai)常規的(de)(de)原料藥分析(xi)中，LOD值和LOQ 值一般(ban)并不重要，因(yin)為被測物(wu)的(de)(de)量一般(ban)要遠遠大于LOQ。但(dan)在(zai)清潔(jie)驗(yan)證中就不同了，因(yin)為其分析(xi)的(de)(de)目的(de)(de)就是要確(que)定痕量的(de)(de)殘留物(wu)，所以這兩個值是清潔(jie)驗(yan)證中非常關(guan)心的(de)(de)。
2.1檢測限（LOD ）
傳統的方(fang)法(fa)(fa)(fa)是信(xin)噪比法(fa)(fa)(fa)，通常LOD 是指信(xin)噪比為3:1時(shi)的被(bei)分(fen)析物濃度(du)。其驗(yan)證方(fang)法(fa)(fa)(fa)如下：
2.1.1儀器分(fen)析中(zhong)的方法：
方法(fa)一：把已知低濃度供(gong)試品溶液(ye)和空白溶液(ye)分別重復測(ce)定(ding)六(liu)次，計算測(ce)得信(xin)(xin)號的平均(jun)值與信(xin)(xin)噪(zao)比(bi)，以信(xin)(xin)噪(zao)比(bi)為(wei)3：1時的相應濃度或注(zhu)入儀器的量定(ding)為(wei)檢出(chu)限(xian)。
方法二(er)：平行測量空白六次，計算背景響應值的(de)標(biao)準(zhun)偏(pian)差，其(qi)3
248中國化工貿(mao)易China Chemical Trade 2.2定量限（LOQ ）
LOQ 是指信噪(zao)比為10:1時的被分析(xi)物濃(nong)度.LOQ是符合一定的精(jing)密(mi)度和線性(xing)要求的最低(di)濃(nong)度。其驗證方法如下：
2.2.1儀器分析中的方法：
方法一：把(ba)已知低濃度供試(shi)品(pin)溶液分(fen)別(bie)重復(fu)測(ce)定(ding)六次，計(ji)算測(ce)得信(xin)號的平均(jun)值與信(xin)噪比，以信(xin)噪比為10：1時的相(xiang)應濃度或注入儀器的量定(ding)為檢出限。
方法二(er)：平(ping)行測量空白六次(ci)，計算(suan)背(bei)景響應(ying)(ying)值得(de)標(biao)準偏(pian)差，其10倍值在工作曲(qu)線上對應(ying)(ying)的待(dai)測物濃度(du)即為估算(suan)的定量限。
2.2.2非儀器分析中的方法(fa)：
用已知(zhi)濃度(du)的(de)被(bei)測物，試驗出其(qi)能以較好的(de)準確(que)度(du)和精(jing)密度(du)檢測出的(de)最(zui)低濃度(du)或量(liang)。
3.線性/范圍3.1線性
線(xian)性(xing)系指(zhi)在設(she)計(ji)范圍內，測(ce)(ce)定結果(guo)(guo)與試樣中被測(ce)(ce)物濃(nong)度(du)呈正比(bi)關(guan)(guan)系的(de)(de)程度(du)。測(ce)(ce)量(liang)方法簡述：在規(gui)定的(de)(de)范圍內，以系列(lie)(lie)樣品測(ce)(ce)得的(de)(de)結果(guo)(guo)和被測(ce)(ce)物濃(nong)度(du)進(jin)行函數作圖，再用(yong)最小(xiao)二乘(cheng)法進(jin)行線(xian)性(xing)回(hui)歸。必要時，測(ce)(ce)試結果(guo)(guo)可經(jing)數學轉換，再進(jin)行線(xian)性(xing)回(hui)歸計(ji)算(suan)，應(ying)列(lie)(lie)出回(hui)歸方程、線(xian)性(xing)相(xiang)關(guan)(guan)系數。線(xian)性(xing)的(de)(de)相(xiang)關(guan)(guan)系數應(ying)不低于0.99，濃(nong)度(du)范圍應(ying)達到殘留物限度(du)的(de)(de)50%~150%。
3.2范圍
范(fan)(fan)圍(wei)(wei)系指能(neng)達到一定精(jing)密度(du)(du)、準確度(du)(du)和線性(xing)，測(ce)(ce)試(shi)方法適用的(de)高(gao)低(di)限濃度(du)(du)或量的(de)區間。測(ce)(ce)量方法簡述：通(tong)過實驗(yan)驗(yan)證(zheng)來證(zheng)明不論被(bei)測(ce)(ce)物濃度(du)(du)是在接近(jin)檢(jian)測(ce)(ce)范(fan)(fan)圍(wei)(wei)邊緣(yuan)還是在檢(jian)測(ce)(ce)范(fan)(fan)圍(wei)(wei)內，都能(neng)被(bei)準確、精(jing)密和線性(xing)良好地檢(jian)測(ce)(ce)的(de)濃度(du)(du)范(fan)(fan)圍(wei)(wei)。定量檢(jian)查應至少測(ce)(ce)試(shi)5個濃度(du)(du)的(de)范(fan)(fan)圍(wei)(wei)并且(qie)包含清潔的(de)最低(di)限和最高(gao)限度(du)(du)。
4.精密度
精密度(du)系指在(zai)規定(ding)的(de)條件下，從同一個均(jun)勻樣品(pin)中，經過多次取樣測定(ding)所得結果之間的(de)接近(jin)程度(du)。通常用相對標準偏差（RSD ）來表示。定(ding)量檢查的(de)RSD 應不得大于10%。
淋洗法和棉簽法用于(yu)限度檢查通常不需要做精密度實驗。5.準確度
準(zhun)確(que)度(du)系指用該方(fang)法(fa)(fa)所(suo)獲得的檢驗(yan)結果與真實值(zhi)(zhi)之間的接近程度(du)，表征了每種分析(xi)方(fang)法(fa)(fa)的正(zheng)確(que)性，一般以回(hui)收率（％）表示。對于設備清潔(jie)分析(xi)方(fang)法(fa)(fa)驗(yan)證(zheng)，取清潔(jie)驗(yan)證(zheng)方(fang)案中(zhong)確(que)定的棉簽(qian)法(fa)(fa)限度(du)標(biao)(biao)準(zhun)中(zhong)的最(zui)低限度(du)值(zhi)(zhi)（L 值(zhi)(zhi)）為(wei)依據(ju)，以20倍的L 值(zhi)(zhi)作為(wei)100%濃(nong)(nong)度(du)標(biao)(biao)準(zhun)點，分別配制(zhi)120%，2.5%濃(nong)(nong)度(du)溶(rong)液，平行(xing)制(zhi)備及測定這三種溶(rong)液六次，計算回(hui)收率及相對標(biao)(biao)準(zhun)偏差(cha)，即得。
三、結語
取樣(yang)方(fang)法的(de)驗證，實(shi)際(ji)是對取樣(yang)人員的(de)操作方(fang)法及清(qing)洗(xi)干凈設備殘留物(wu)轉移和溶出過程的(de)全面(mian)考察。清(qing)潔分析(xi)方(fang)法驗證是證明(ming)采(cai)用的(de)方(fang)法適(shi)合于相應(ying)的(de)檢測(ce)要求(qiu)，是保證分析(xi)結果真實(shi)可靠的(de)前(qian)提條(tiao)件。從而遵循GMP 要求(qiu)，有(you)效的(de)防止了交差污染。