1 基本原理及主要參數
了解生化分析儀基本參數的原理，有利于儀器、試劑的正確使用，有助于正確分析和處理測定數據。生化分析儀根據自動化程度分半自動和全自動，從目前試劑盒供應情況來看，主要的測定方法為：終點法(包括一點終點法和兩點終點法)、速率法(連續檢測法)、速率兩點法(兩點法)，后兩種統稱動力學法。
2 主要參數設置的技巧
2．1 方法類型可根據試劑盒要求或反應原理來設置。對于半自動生化分析儀終點法只是一點終點法，全自動生化儀單試劑選擇一點終點法，而雙試劑選擇兩點終點法。大多數酶學測定使用速率法，尿素氮、肌酐測定等用兩點法。
2．2 測定波長測定波長選擇有三個主要條件：(1)待測物質在該波長下的光吸收最大。(2)其吸收峰宜較寬而鈍，(3)常見干擾物在該波長下的光吸收最小。試劑盒說明一般已提供波長參數。有些儀器波長選擇受濾光片數量限制，應該就近選擇為原則。
2．3 測定溫度一般全自動生化儀都是37℃ ，而半自動生化儀有室溫、25~C、30cc、37~C等，終點法由于反應在機外進行，選擇室溫可以減少儀器溫度調整時間，提高工作效率，而速率法和兩點法都選擇37℃比較合適。
2．4 樣(yang)(yang)(yang)本體(ti)(ti)積(ji)(ji)(ji)分(fen)數(shu)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)體(ti)(ti)積(ji)(ji)(ji)分(fen)數(shu)即(ji)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)體(ti)(ti)積(ji)(ji)(ji)與(yu)反(fan)應液總體(ti)(ti)積(ji)(ji)(ji)的(de)比(bi)值(sv／TV)。酶活力測定中，樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)在(zai)總體(ti)(ti)積(ji)(ji)(ji)中的(de)比(bi)例(li)(li)(li)應在(zai)10％以(yi)(yi)下。一般(ban)(ban)來說，待測物質在(zai)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)中含(han)量(liang)低的(de)、生理波動范圍大的(de)，樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)用量(liang)較大。如(ru)Trinder反(fan)應測定血清(qing)葡萄糖(tang)、膽固(gu)醇(chun)等，樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)比(bi)例(li)(li)(li)多(duo)為(wei)1：100，測定血尿酸或高密度(du)脂蛋(dan)白(bai)膽固(gu)醇(chun)，常(chang)增(zeng)加(jia)為(wei)1：50；AIJT和AST的(de)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)比(bi)例(li)(li)(li)多(duo)為(wei)1：10至1：20。方(fang)法(fa)靈(ling)敏、吸光度(du)高的(de)實(shi)驗方(fang)法(fa)，樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)比(bi)例(li)(li)(li)小，如(ru)白(bai)蛋(dan)白(bai)BCG法(fa)，樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)比(bi)例(li)(li)(li)常(chang)為(wei)1：200。肌酐Jaffe氏法(fa)監(jian)測時間短、吸光度(du)值較低，樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)比(bi)例(li)(li)(li)多(duo)為(wei)l：10。一般(ban)(ban)應以(yi)(yi)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)說明為(wei)準，不宜輕(qing)易改(gai)動。可根據(ju)最終反(fan)應液的(de)量(liang)來計(ji)算樣(yang)(yang)(yang)本量(liang)和試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)量(liang)。
2．5 吸(xi)液量主(zhu)要是(shi)針對流(liu)動(dong)比色的全(quan)自(zi)動(dong)或半自(zi)動(dong)儀(yi)器(qi)的參數，原(yuan)則是(shi)吸(xi)人量不(bu)得大(da)于(yu)或等于(yu)反應液總體積，否(fou)則會導致吸(xi)空形(xing)成比色池氣(qi)泡，最好(hao)留100～200ul的余地。
2．6 延(yan)遲(chi)(chi)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)延(yan)遲(chi)(chi)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)(Delay Time)指試(shi)劑與樣(yang)品(pin)(pin)混合(he)后到監(jian)測(ce)(ce)(ce)開始之(zhi)間(jian)(jian)的(de)(de)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)。延(yan)遲(chi)(chi)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)的(de)(de)選擇取決于(yu)被測(ce)(ce)(ce)物(wu)(wu)質的(de)(de)濃度(酶的(de)(de)活(huo)性(xing))大小、反(fan)(fan)應(ying)(ying)速度的(de)(de)快慢、酶促反(fan)(fan)應(ying)(ying)的(de)(de)級數(shu)(shu)、樣(yang)品(pin)(pin)中干擾(rao)物(wu)(wu)消除所需的(de)(de)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)等。比(bi)如(ru)：CHE活(huo)性(xing)高(gao)僅需20— 30秒(miao)，LDH一(yi)級反(fan)(fan)應(ying)(ying)需30～40秒(miao)，AIJT需40～6O秒(miao)，AST需60～75秒(miao)，CK需90～120秒(miao)。半自動生(sheng)化儀(yi)上(shang)酶活(huo)性(xing)連續監(jian)測(ce)(ce)(ce)法的(de)(de)延(yan)遲(chi)(chi)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)設定，由于(yu)只能(neng)單份(fen)樣(yang)品(pin)(pin)逐一(yi)測(ce)(ce)(ce)定，若(ruo)延(yan)遲(chi)(chi)時(shi)(shi)(shi)問(wen)全部設置在(zai)儀(yi)器內(nei)，每個延(yan)遲(chi)(chi)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)加(jia)監(jian)測(ce)(ce)(ce)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)至(zhi)少1分(fen)鐘以上(shang)，守候時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)較長。工(gong)作量大時(shi)(shi)(shi)，可以根據儀(yi)器控溫(wen)、加(jia)樣(yang)及讀數(shu)(shu)和試(shi)劑特點(dian)，以及室溫(wen)情況(kuang)，將延(yan)遲(chi)(chi)時(shi)(shi)(shi)問(wen)挪一(yi)部分(fen)到機(ji)外，套式操(cao)作，但要確保(bao)機(ji)內(nei)延(yan)遲(chi)(chi)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)不要進入線性(xing)反(fan)(fan)應(ying)(ying)期(qi)(qi)。兼顧(gu)延(yan)遲(chi)(chi)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)和監(jian)測(ce)(ce)(ce)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)反(fan)(fan)應(ying)(ying)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)是(shi)有限制的(de)(de)。在(zai)速率(lv)法和兩(liang)點(dian)法中，延(yan)長延(yan)遲(chi)(chi)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)必然縮短線性(xing)監(jian)測(ce)(ce)(ce)期(qi)(qi)，減少測(ce)(ce)(ce)定的(de)(de)線性(xing)范圍，也易發生(sheng)底物(wu)(wu)耗盡。
2．7 監(jian)測(ce)(ce)時間(jian)(jian) 酶促反應(ying)延(yan)遲期后，在(zai)過量底(di)(di)物的(de)(de)(de)存(cun)在(zai)下，反應(ying)速(su)率加快并(bing)達到一個(ge)反應(ying)速(su)率穩定(ding)的(de)(de)(de)階段，即(ji)酶促反應(ying)以恒定(ding)的(de)(de)(de)速(su)率進(jin)行，不(bu)受底(di)(di)物濃度的(de)(de)(de)影響，這段時間(jian)(jian)稱為線性反應(ying)期或零級(ji)反應(ying)期，自動(dong)化(hua)生化(hua)分(fen)析(xi)儀(yi)的(de)(de)(de)監(jian)測(ce)(ce)時間(jian)(jian)即(ji)為此期。測(ce)(ce)酶的(de)(de)(de)連續監(jian)測(ce)(ce)法(fa)至(zhi)少90—120s或至(zhi)少4點(3個(ge)AA)，少于(yu)3個(ge)△A不(bu)能稱為連續監(jian)測(ce)(ce)法(fa)，因為不(bu)能計算線性度。監(jian)測(ce)(ce)時間(jian)(jian)過長則(ze)容易(yi)發生底(di)(di)物耗盡(jin)，可測(ce)(ce)范圍變窄。
2．8 標準液濃度終點法和兩點法必須設置標準，選擇合格的標準品很重要。有些試劑盒配有標準液，但是部分項目標準液定標偏差太大，我們使用的是干粉復合羅氏校準液，復溶后分裝冷凍保存，只要復溶的水質保證，避免反復凍融，校準的結果還是很滿意的。注意校準液靶值獲得的方法學，方法不同耙值是有差異的，比較典型的是ALP測定有IFCC和DGKC法，差異比較大，不可簡單套用。2．9 K值速率法測定無需帶標準或做標準曲線，首先確定樣本量和工作試劑量，再根據被測物質的摩爾消光系數，就
可按速率法計算公式計算出因素K值了。K=TV×10。／(8×SV XL)，TV為反應液總體積，sV為樣本體積，L為比色杯光徑(em)，￡為毫摩爾消光系數，如NADH／NADPH34Onm為6．22，對硝基苯胺405nm為9．9，5一氨基一2一硝基苯甲酸405rim為9．5，對硝基酚405nm為10．5，5一硫代一2一硝基苯甲酸405nm為13．3。
2．10 試(shi)(shi)劑吸(xi)光度上(shang)下(xia)限(xian)有(you)的(de)生(sheng)化(hua)儀(yi)要(yao)求設置試(shi)(shi)劑吸(xi)光度上(shang)下(xia)限(xian)，主(zhu)要(yao)是(shi)(shi)用來(lai)監測試(shi)(shi)劑的(de)質(zhi)(zhi)量(liang)的(de)，但是(shi)(shi)試(shi)(shi)劑吸(xi)光度上(shang)限(xian)和下(xia)限(xian)不是(shi)(shi)試(shi)(shi)劑質(zhi)(zhi)量(liang)的(de)唯一(yi)指針。因此，一(yi)定(ding)的(de)校(xiao)準頻率(lv)和室內質(zhi)(zhi)控是(shi)(shi)質(zhi)(zhi)量(liang)保證的(de)必需(xu)手(shou)段。我們在(zai)實際工(gong)作中就遇(yu)到酶活力測定(ding)的(de)試(shi)(shi)劑空白數據在(zai)規(gui)定(ding)限(xian)值內，但質(zhi)(zhi)控物測定(ding)結果連續偏(pian)低，病(bing)人(ren)結果因每天標本少而難以(yi)判(pan)斷(duan)，最后發現是(shi)(shi)試(shi)(shi)劑質(zhi)(zhi)量(liang)下(xia)降(jiang)。